L’objectif de cette extraction est de libérer les polyphénols présents dans des structures vacuolaires par rupture du tissu végétal et par diffusion.
Préparation des échantillons : certains polyphénols sont instables, se dégradent (oxydation) par action enzymatique, il est prudent d’incorporer un antioxydant (BHT, Vit C…)
Délipidation pour les matières riches en lipides
Facteurs influençant l’efficacité de l’extraction aux solvants:
Nature du solvant: eau, méthanol, acétonitrile, acétone, acétate d’éthyle.
Le pH du milieu d’extraction : détermine le degré de solubilité des substances solubles
La température : 25-55°C
Le nombre d’extractions et le volume du solvant utilisé
La taille et la forme des particules : produit bien homogénéisé
Technique pour fractionner/purifier ou encore pour pré-concentrer des composés présents dans des matrices liquides.
C18 pour extraire les acides phénoliques, flavonoïdes
Amberlite (échangeuse d’ions) elle est utilisé pour éliminer les composés polaires non phénoliques des extraits riches en anthocyanins
Polyvynilpyrrolidone (polyclar AT) sont utilisés pour séparer les anthocyanins
PVPP pour éliminer les sucres et acides.
On utilise un solvant (méthanol, éthanol) pour décrocher les polyphénols fixés sur le support.
Le CO2 supercritique est très utilisé comme solvant d’extraction.
Sa faible viscosité lui confère une grande capacité de diffusion lui permettant d’avoir accès à des composés phénoliques liés à la paroi cellulaire.
sa densité relativement élevé lui confère un pouvoir de solvatation élevé lui permettant ainsi un meilleur taux d’extraction
Procédé non dénaturant : minimise les phénomènes d’oxydation ou isomérisation
Temps d’extraction réduit
MicroF, UF et NanoF utilisées pour fractionner et concentrer les composés phénoliques.
la microF permet la délipidation
la microfiltration pour dessaler……
Procédés physiques
peu dénaturants
non polluants
Pour les extraits végétaux et produits finis les techniques d’extraction sont identiques à celles utilisées pour l’extraction des matières premières
Une validation de la technique d’extraction doit être effectuée sur chaque nouvelle matrice : évaluation de la répétabilité, reproductibilité et justesse de la méthode.
Dans les tissus mammaliens les polyphénols sont habituellement présents sous formes conjugués ( bêta glucuronides et sulfates)
Une hydrolyse enzymatique, à l’aide d’un mélange enzymatique, est nécessaire avant l’extraction des polyphénols
Dosage des polyphénols totaux par spectrophotométrie
Méthode de Folin (méthode non spécifique)
Dosage des polyphénols par méthode HPLC
séparation sur colonne phase inverse (C18)
détection à l’aide de :
spéctro UV (préférentiellement un barrette de diode)